تخلیص DNA با استفاده از رسوب اتانول
از این روش برای تخلیص و تغلیظ DNA استفاده می شود. باید توجه داشت که رسوب (پلت) اغلب بزرگ نیست و براحتی قابل رویت نیست. هنگام پیپتاژ برای جلوگیری از از دست دادن رسوب باید مراقب بود.
1- افزودن سدیم استات 3 مولار با pH 5/5 به حجم یک به ده. باید با عمل واژگونی حسابی مخلوط گردد.
2- اتانول 95 تا 100% به حجم دو تا دو تا سه اضافه می کردد. باز هم با عمل واژگونی لوله تیوب مخلوط میگردد.
3- مخلوط حاصل با دور 14000rpm در دمای 4 درجه در زمان 10 تا 15 دقیقه سانتریوفوژ میگردد.
4- با دقت فراوان محلول رویی (سوپرناتانت) خارج میگردد بدون اینکه به رسوب آسیبی وارد گردد.
5- 500 میکرولیتر اتانول 70% به مخلوط اضافه میگردد.
6- مخلوط حاصل با دور 14000rpm در دمای 4 درجه به مدت دو دقیقه سانتریوفوژ میگردد.
7- محلول رویی را خارج کرده و رسوب به مدت ده دقیقه در دمای محیط خشک میگردد.
8- در مرحه آخر رسوب با آب یا بافر TE مخبوط میگردد. اغلب بافر TE ترجیح داده میشود زیرا DNA در این محلول پایدارتر است.
این وبلاگ برای علاقه مندان به رشتۀ بیوتکنولوژی توسط عده ای از دانشجویان این رشته ایجاد شده و امید است که با یاری دوستان و اساتید محترم بتوان اطلاعات مفیدی را در اختیار علاقه مندان قرار داد.